(Prietoková cytometria, FCM) je bunkový analyzátor, ktorý meria intenzitu fluorescencie markerov zafarbených buniek. Je to high-tech technológia vyvinutá na základe analýzy a triedenia jednotlivých buniek. Môže rýchlo zmerať a klasifikovať veľkosť, vnútornú štruktúru, DNA, RNA, proteíny, antigény a iné fyzikálne alebo chemické vlastnosti buniek a môže byť založená na zbere týchto klasifikácií.
Prietokový cytometer pozostáva hlavne z nasledujúcich piatich častí:
1 Systém prietokovej komory a tekutín
2 laserový zdroj svetla a systém tvarovania lúča
3 optický systém
4 elektronika, ukladací, zobrazovací a analytický systém
5 systém triedenia buniek
Medzi nimi je laserová excitácia v laserovom zdroji svetla a systému tvorby lúčov hlavným meraním fluorescenčných signálov v prietokovej cytometrii. Intenzita excitačného svetla a čas expozície súvisia s intenzitou fluorescenčného signálu. Laser je koherentný zdroj svetla, ktorý môže poskytovať osvetlenie s jednou vlnovou dĺžkou, vysokou intenzitou a vysokou stabilitou. Je ideálnym zdrojom budenia svetla, ktorý spĺňa tieto požiadavky.
Medzi laserovým zdrojom a prietokovou komorou sú dva valcovité šošovky. Tieto šošovky zameriavajú laserový lúč s kruhovým prierezom emitovaným z laserového zdroja do eliptického lúča s menším prierezom (22 μm x 66 μm). Laserová energia v tomto eliptickom lúči je distribuovaná podľa normálnej distribúcie, čím zabezpečuje konzistentnú intenzitu osvetlenia buniek prechádzajúcich cez oblasť detekcie laserov. Na druhej strane optický systém pozostáva z viacerých súborov šošoviek, dierok a filtrov, ktoré možno zhruba rozdeliť do dvoch skupín: proti prúdu a po prúde od prietokovej komory.
Optický systém pred prietokovou komorou pozostáva z šošovky a dierky. Hlavnou funkciou šošovky a dierky (zvyčajne dva šošovky a dierka) je zaostrovanie laserového lúča kruhovým prierezom emitovaným laserovým zdrojom do eliptického lúča s menším prierezom. To distribuuje laserovú energiu podľa normálneho rozdelenia, zabezpečuje konzistentnú intenzitu osvetlenia buniek v oblasti detekcie laserov a minimalizuje interferenciu z bludného svetla.
Existujú tri hlavné typy filtrov:
1: Long Pass Filter (LPF) - Umožňuje iba svetlo s vlnovými dĺžkami vyššími ako špecifická hodnota.
2: Short -Pass Filter (SPF) - Umožňuje iba svetlo s vlnovými dĺžkami pod špecifickou hodnotou.
3: Bandpass Filter (BPF) - Umožňuje prejsť iba svetlo v špecifickom rozsahu vlnovej dĺžky.
Rôzne kombinácie filtrov môžu nasmerovať fluorescenčné signály v rôznych vlnových dĺžkach na jednotlivé fotomultiplerové trubice (PMT). Napríklad filtre na detekciu zelenej fluorescencie (FITC) pred PMT sú LPF550 a BPF525. Filtre použité na detekciu fluorescencie oranžovo-červenej (PE) pred PMT sú LPF600 a BPF575. Filtre na detekciu červenej fluorescencie (CY5) pred PMT sú LPF650 a BPF675.
Prietoková cytometria sa používa hlavne na triedenie buniek. S rozvojom počítačových technológií sa rozširuje vývoj imunológie a vynález technológie monoklonálnych protilátok, jej aplikácie v oblasti biológie, medicíny, farmácie a iných oblastí sa čoraz rozšírili. Medzi tieto aplikácie patrí analýza dynamiky buniek, bunková apoptóza, typovanie buniek, diagnostika nádoru, analýza účinnosti liečiva atď.
Čas príspevku: sep-21-2023
