(Prietoková cytometria, FCM) je bunkový analyzátor, ktorý meria intenzitu fluorescencie zafarbených bunkových markerov. Ide o high-tech technológiu vyvinutú na základe analýzy a triedenia jednotlivých buniek. Dokáže rýchlo zmerať a klasifikovať veľkosť, vnútornú štruktúru, DNA, RNA, proteíny, antigény a iné fyzikálne alebo chemické vlastnosti buniek a môže byť založený na zbere týchto klasifikácií.
Prietokový cytometer pozostáva hlavne z nasledujúcich piatich častí:
1 Prietoková komora a fluidný systém
2 Laserový zdroj svetla a systém tvarovania lúča
3 Optický systém
4 Elektronický, úložný, zobrazovací a analytický systém
5 Systém triedenia buniek
Spomedzi nich je hlavným meraním fluorescenčných signálov v prietokovej cytometrii laserová excitácia v zdroji laserového svetla a systéme tvorby lúča. Intenzita excitačného svetla a expozičný čas súvisia s intenzitou fluorescenčného signálu. Laser je koherentný svetelný zdroj, ktorý môže poskytnúť osvetlenie s jednou vlnovou dĺžkou, vysokou intenzitou a vysokou stabilitou. Je ideálnym zdrojom excitačného svetla, ktorý spĺňa tieto požiadavky.
Medzi zdrojom lasera a prietokovou komorou sú dve cylindrické šošovky. Tieto šošovky zaostrujú laserový lúč s kruhovým prierezom vyžarovaný z laserového zdroja do eliptického lúča s menším prierezom (22 μm × 66 μm). Laserová energia v tomto eliptickom lúči je distribuovaná podľa normálnej distribúcie, čo zaisťuje konzistentnú intenzitu osvetlenia pre bunky prechádzajúce oblasťou detekcie lasera. Na druhej strane, optický systém pozostáva z viacerých sád šošoviek, malých otvorov a filtrov, ktoré možno zhruba rozdeliť do dvoch skupín: pred prietokovou komorou a za prietokovou komorou.
Optický systém pred prietokovou komorou pozostáva zo šošovky a dierky. Hlavnou funkciou šošovky a dierky (zvyčajne dve šošovky a dierka) je zaostrenie laserového lúča s kruhovým prierezom vyžarovaného laserovým zdrojom na eliptický lúč s menším prierezom. To rozdeľuje energiu lasera podľa normálnej distribúcie, zaisťuje konzistentnú intenzitu osvetlenia buniek v celej oblasti detekcie lasera a minimalizuje rušenie rozptýleným svetlom.
Existujú tri hlavné typy filtrov:
1: Dlhopriepustný filter (LPF) – prepúšťa len svetlo s vlnovou dĺžkou vyššou ako je špecifická hodnota.
2: Krátkopriepustný filter (SPF) – prepúšťa len svetlo s vlnovou dĺžkou pod špecifickou hodnotou.
3: Pásmový filter (BPF) – prepúšťa len svetlo v špecifickom rozsahu vlnových dĺžok.
Rôzne kombinácie filtrov môžu nasmerovať fluorescenčné signály pri rôznych vlnových dĺžkach do jednotlivých fotonásobičov (PMT). Napríklad filtre na detekciu zelenej fluorescencie (FITC) pred PMT sú LPF550 a BPF525. Filtre používané na detekciu oranžovo-červenej fluorescencie (PE) pred PMT sú LPF600 a BPF575. Filtre na detekciu červenej fluorescencie (CY5) pred PMT sú LPF650 a BPF675.
Prietoková cytometria sa používa hlavne na triedenie buniek. S pokrokom výpočtovej techniky, rozvojom imunológie a vynálezom technológie monoklonálnych protilátok sa jej aplikácie v biológii, medicíne, farmácii a iných oblastiach čoraz viac rozširujú. Tieto aplikácie zahŕňajú analýzu bunkovej dynamiky, bunkovú apoptózu, typizáciu buniek, diagnostiku nádorov, analýzu účinnosti liekov atď.
Čas odoslania: 21. september 2023
