(Prietoková cytometria, FCM) je bunkový analyzátor, ktorý meria intenzitu fluorescencie zafarbených bunkových markerov. Ide o high-tech technológiu vyvinutú na základe analýzy a triedenia jednotlivých buniek. Dokáže rýchlo zmerať a klasifikovať veľkosť, vnútornú štruktúru, DNA, RNA, proteíny, antigény a ďalšie fyzikálne alebo chemické vlastnosti buniek a môže byť založená na zhromažďovaní týchto klasifikácií.
Prietokový cytometer sa skladá hlavne z nasledujúcich piatich častí:
1 Prietoková komora a fluidný systém
2 Zdroj laserového svetla a systém tvarovania lúča
3 Optický systém
4 Elektronika, systém ukladania, zobrazovania a analýzy
5 Systém triedenia buniek
Medzi nimi je laserová excitácia v laserovom svetelnom zdroji a systéme formovania lúča hlavným meraním fluorescenčných signálov v prietokovej cytometrii. Intenzita excitačného svetla a expozičný čas súvisia s intenzitou fluorescenčného signálu. Laser je koherentný svetelný zdroj, ktorý dokáže poskytnúť osvetlenie s jednou vlnovou dĺžkou, vysokou intenzitou a vysokou stabilitou. Je ideálnym excitačným svetelným zdrojom, ktorý spĺňa tieto požiadavky.
Medzi laserovým zdrojom a prietokovou komorou sú dve valcové šošovky. Tieto šošovky zaostrujú laserový lúč s kruhovým prierezom vyžarovaný z laserového zdroja do eliptického lúča s menším prierezom (22 μm × 66 μm). Laserová energia v tomto eliptickom lúči je rozložená podľa normálneho rozdelenia, čo zabezpečuje konzistentnú intenzitu osvetlenia buniek prechádzajúcich oblasťou laserovej detekcie. Na druhej strane, optický systém pozostáva z viacerých súprav šošoviek, dierkových filtrov a filtrov, ktoré možno zhruba rozdeliť do dvoch skupín: pred a za prietokovou komorou.
Optický systém pred prietokovou komorou pozostáva zo šošovky a dierky. Hlavnou funkciou šošovky a dierky (zvyčajne dvoch šošoviek a jednej dierky) je zaostriť laserový lúč s kruhovým prierezom vyžarovaný laserovým zdrojom do eliptického lúča s menším prierezom. Tým sa laserová energia rozdeľuje podľa normálneho rozdelenia, čím sa zabezpečuje konzistentná intenzita osvetlenia buniek v celej oblasti detekcie laseru a minimalizuje sa rušenie rozptýleným svetlom.
Existujú tri hlavné typy filtrov:
1: Dlhopriepustný filter (LPF) – prepúšťa iba svetlo s vlnovými dĺžkami vyššími ako je špecifická hodnota.
2: Krátkopriepustný filter (SPF) – prepúšťa iba svetlo s vlnovými dĺžkami pod určitou hodnotou.
3: Pásmový filter (BPF) – prepúšťa iba svetlo v určitom rozsahu vlnových dĺžok.
Rôzne kombinácie filtrov môžu smerovať fluorescenčné signály s rôznymi vlnovými dĺžkami do jednotlivých fotonásobičov (PMT). Napríklad filtre na detekciu zelenej fluorescencie (FITC) pred PMT sú LPF550 a BPF525. Filtre používané na detekciu oranžovo-červenej fluorescencie (PE) pred PMT sú LPF600 a BPF575. Filtre na detekciu červenej fluorescencie (CY5) pred PMT sú LPF650 a BPF675.
Prietoková cytometria sa používa hlavne na triedenie buniek. S pokrokom v počítačovej technológii, rozvojom imunológie a vynálezom technológie monoklonálnych protilátok sa jej aplikácie v biológii, medicíne, farmácii a ďalších oblastiach stávajú čoraz rozšírenejšími. Medzi tieto aplikácie patrí analýza bunkovej dynamiky, apoptóza buniek, typizácia buniek, diagnostika nádorov, analýza účinnosti liekov atď.
Čas uverejnenia: 21. septembra 2023
